培养基
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长有菌落(橙色)的琼脂平板
体现微生物四种不同代谢形式的培养基
发酵培养基从广义上而言,是指可供微生物细胞生长繁殖所需的一组营养物质与原料。同时其也为微生物培养提供其他所必须的条件。 发酵培养基的基本作用在于满足菌体的生长,促进产物的形成。
[编辑] 基本要求
[编辑] 分类培养基按其组成物质的纯度、状态、用途可分为三大类型。 [编辑] 按纯度
是指原料其化学成分明确、稳定的培养基。适合于研究菌种基本代谢和过程的物质变化规律,但是培养基营养单一,价格较高,不适合用于大规模工业生产。
这一类培养基采用天然的原料,所以其原料来源丰富(大多为农副产品)、价格低廉、适于工业。然而原料质量等方面不加控制会影响生产的稳定性。 [编辑] 按状态
适合于菌种和孢子的培养和保存,也广泛应用于有子实体的真菌类,如香菇、白木耳等的生产。
在配好的液体培养基中加入少量的琼脂,一般用量为0.5%~0.8%,主要用于微生物的鉴定。
80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的营养成分,是发酵工业大规模使用的培养基。 [编辑] 按用途培养基按其用途可分为孢子(斜面)培养基、种子培养基和发酵培养基三种。 [编辑] 成分及来源[编辑] 碳源即提供微生物菌种的生长繁殖所需的能源和合成菌体所必需的碳成分,同时提供合成目的产物所必须的碳成分。 常见的来源主要有糖类、油脂、有机酸、正烷烃等。 工业上常用的糖类主要包括:葡萄糖、糖蜜(制糖生产时的结晶母液)、淀粉等。 [编辑] 氮源氮源主要用于构成菌体细胞物质(氨基酸,蛋白质、核酸等)和含氮代谢物。常用的氮源可分为两大类:有机氮源和无机氮源。有机氮源和无机氮源应当混合使用,在发酵早期应使用容易利用易同化的氮源,即无机氮源;到了中期,菌体的代谢酶系已形成,则利用蛋白质。 [编辑] 无机氮源无机氮源主要包括氨盐、硝酸盐和氨水。 微生物对它们的吸收快,所以也称之谓迅速利用的氮源。但无机氮源的迅速利用常会引起pH的变化。 无机氮源被菌体作为氮源利用后,培养液中就留下了酸性或碱性物质,这种经微生物生理作用(代谢)后能形成酸性物质的无机氮源叫生理酸性物质,如硫酸胺;若菌体代谢后能产生碱性物质的则此种无机氮源称为生理碱性物质,如硝酸钠。正确使用生理酸碱性物质,对稳定和调节发酵过程的pH有积极作用。 [编辑] 有机氮源有机氮源主要来源于工业上一些廉价的原料:花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体和酒糟等。其成分复杂,除提供氮源外,有些有机氮源还提供大量的无机盐及生长因子。 [编辑] 无机盐与微量元素这类物质的作用各不相同,主要在碳氮源上以盐形式为补充。 [编辑] 生长因子、前体和产物促进剂
从广义上讲,凡是微生物生长不可缺少的微量的有机物质,如氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等均称生长因子。如以糖质原料为碳源的谷氨酸生产菌均为生物素缺陷型,以生物素为生长因子,生长因子对发酵的调控起到重要的作用。有机氮源是这些生长因子的重要来源,多数有机氮源含有较多的B簇维生素和微量元素及一些微生物生长不可缺少的生长因子。
前体指某些化合物加入到发酵培养基中,能直接为微生物在生物合成过程中合成到产物物分子中去,而其自身的结构并没有多大变化,但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。
指那些非细胞生长所必须的营养物,又非前体,但加入后却能提高产量的添加剂。其提高产量的机制还不完全清楚,其原因可能是多方面的,主要包括:有些促进剂本身是酶的诱导物;有些促进剂是表面活性剂,可改善细胞的透性,改善细胞与氧的接触从而促进酶的分泌与生产,也有人认为表面活性剂对酶的表面失活有保护作用;有些促进剂的作用是沉淀或螯合有害的重金属离子。 [编辑] 水对于发酵工厂来说,恒定的水源是至关重要的,因为在不同水源中存在的各种因素对微生物发酵代谢影响甚大。水源质量的主要考虑参数包括pH值、溶解氧、可溶性固体、污染程度以及矿物质组成和含量。 [编辑] 培养基的设计与优化目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断和计算出适合某一菌种的培养基配方,只能用生物化学、细胞生物学、微生物学等的基本理论,参照前人所使用的较适合某一类菌种的经验配方,再结合所用菌种和产品的特性,采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备,按照一定的实验设计和实验方法选择出较为适合的培养基。 培养基设计的基本步骤是:
[编辑] 发酵培养基的实例
碳源:葡萄糖、甘油 氮源:胰蛋白胨、酵母粉 无机盐:磷、镁等
基础培养基:F12、DMEM等 血清(5-10%):胎牛血清(FBS)、小牛血清(CS)、马血清(HS) 水:超纯水 其它:NaHCO3(CO2)、抗生素 [编辑] 参见
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